ELISA(酶联免疫吸附测定)技术基于抗原-抗体的特异性结合反应。在人尿酸盐转运蛋白1ELISA试剂盒中,先将特异性抗体包被在微孔板上,然后加入含有URAT1的样本,URAT1蛋白会与包被在微孔板上的抗体结合。通过洗涤去除未结合的物质后,再加入酶标记的二抗来识别已结合的URAT1蛋白。最后,加入酶的底物产生颜色反应,其强度与URAT1的浓度成正比,通过光谱仪等仪器读取吸光度值(OD值),实现对URAT1的定量分析。
人尿酸盐转运蛋白1elisa试剂盒的组成:
1.预涂有抗体的微孔板:96孔或384孔板,已经预先涂覆了针对URAT1的特异性捕获抗体。
2.样本稀释液:用于稀释血清、血浆或其他体液样本。
3.标准品:已知浓度的URAT1蛋白,用于构建标准曲线,便于计算样本中URAT1的浓度。
4.酶标记的二抗:能够特异性结合URAT1并与之形成复合物的酶标记抗体。
5.底物溶液:酶的底物,添加后会产生颜色变化,用于信号检测。
6.停止液:用于终止酶促反应,停止颜色发展。
7.洗涤缓冲液:用于清洗微孔板,去除未结合的样本和酶标记的二抗。
8.说明书:提供详细的实验步骤、数据解释和安全警示等信息。
应用:
1.疾病诊断:高尿酸血症和痛风的诊断,URAT1水平的异常升高可能提示这些疾病的存在。
2.研究工具:在药物研发中,用于筛选和评估潜在影响URAT1功能的药物。
3.疾病监测:对于正在接受降尿酸治疗的患者,监测URAT1水平有助于评估治疗效果。
人尿酸盐转运蛋白1elisa试剂盒的操作步骤:
1.样本准备:将待测血清、血浆等生物样本进行适当稀释。
2.加样:将稀释后的样本以及不同浓度的标准品分别加入到微孔板中,并孵育一定时间。
3.洗涤:倒掉液体,用洗涤缓冲液清洗微孔板数次,以去除未结合的物质。
4.加酶标二抗:加入酶标记的二抗,再次孵育,使其与已结合的URAT1蛋白反应。
5.再次洗涤:重复洗涤步骤,确保只保留特异性结合的抗原-抗体复合物。
6.显色:加入底物溶液,经过一定时间的孵育后,产生颜色变化。
7.终止反应:通过添加停止液来结束颜色发展。
8.读板:使用光谱仪读取各孔的吸光度值,波长通常为450nm。